試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。

產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品名稱：非蛋白質(zhì)巰基(NPTs)試劑盒說明書

規(guī)格：24樣 48樣

貨號：AS028

檢測方法：可見分光光度法 微板法

產(chǎn)品分類：氧化應(yīng)激系列

貯存溫度：2～8℃。

本試劑盒保質(zhì)期：6個月。本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)！

1、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。

【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取

② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本：

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；

12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。

MNS1  減數(shù)分裂特異核結(jié)構(gòu)1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Smad2(Ser245/250/255)  磷化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體 規(guī)格: 0.1ml

ILVBL  乙酰合成抗體 規(guī)格: 0.2mlBCL7B  BCL7B抗體 規(guī)格: 0.2ml

DHFRL1  二葉還原樣1抗體 規(guī)格: 0.2ml

PDGFC/VEGF E  小板源性生因子C抗體 規(guī)格: 0.2ml

ADAM12/MLTN  去整合樣金屬12抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-chicken IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1ml

Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

RRAD  RRAD抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD144/VECD/VE Cadherin  上皮型鈣粘附分子抗體 規(guī)格: 0.1ml

DUT  脫氧尿三磷DUT抗體 規(guī)格: 0.1mlLck/p56-LCK  淋細(xì)胞特異性激抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-Tau protein(Thr489)  磷化微管相關(guān)抗體 規(guī)格: 0.1mlSmoothened/SMO  跨膜Smoothened抗體 規(guī)格: 0.1ml

非蛋白質(zhì)巰基(NPTs)試劑盒說明書1818-71-9豆 規(guī)格： 20mg

107438-79-9銀杏內(nèi)酯J;Ginkgolide J 規(guī)格： 20mg

29232-93-7甲基磷;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 規(guī)格： 0.1g

環(huán) 規(guī)格： 100mg

539-15-1大麥芽;Hordenine 規(guī)格： 20mg

19083-00-2纖細(xì)薯蕷皂 規(guī)格： 20mg

檳榔花 規(guī)格： 2g

92-61-5東莨菪內(nèi)酯 規(guī)格： 20mg

22608-11-3去甲氧基姜黃 規(guī)格： 20mg

20033;古丁 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。